免疫印跡Western Blot檢測-上海信帆生物

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蛋白質(zhì)免疫印跡法 (Western Blot ) ，簡稱WB ，是指通過SDS-PAGE膠將不同分子量的蛋白質(zhì)分離開，然后將目標蛋白轉(zhuǎn)移到載體(PVDF)膜上，利用抗原抗體的特異性結合，用特異性的一抗結合目標蛋白，用HRP標記的二抗結合一抗，再加以ECL發(fā)光液顯色，檢測組織或者細胞內(nèi)某種或者某些特異性蛋白質(zhì)的表達。蛋白質(zhì)免疫印跡是做蛋白質(zhì)分析的一種常規(guī)技術，常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進行定性和半定量分析，還可以用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-DNA、蛋白質(zhì)-RNA相互作用后續(xù)分析。



WB實驗代測原理： 1、WB實驗代測采用的是聚丙烯先胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針"是抗體，“顯色"用標記的二抗。經(jīng)過PAGE(聚丙烯先胺凝膠電泳)分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。
2、以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術也廣泛應用于檢測蛋白水平的表達。

以上是小編為大家講解的原理，那么小編接下來進一步講解基本過程有哪些？

二：WB實驗代測基本過程：
1、獲取細胞或組織裂解物。
2、根據(jù)檢測蛋白的位置選擇合適的裂解buffer。
3、選擇合適的蛋白酶抑制劑，避免蛋白降解，從而保證檢測的準確性。
4、蛋白定量。
5、電泳分離蛋白質(zhì)。
6、轉(zhuǎn)膜：根據(jù)不同的檢測目的和待測蛋白的特性,選擇合適的膜類型。
7、封閉：去掉膜上多余的非特異性結合位點，降低背景。

以上就是小編為大家介紹的全部內(nèi)容，希望對大家有所幫助。

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