鏈球菌G蛋白瓊脂糖凝膠FF預裝柱的使用注意事項

鏈球菌G蛋白（Streptococcus Protein G 簡稱SPG）是G、C型鏈球菌細胞壁中的一種蛋白質(zhì)，能特異性地同免疫球蛋白IgG分子的Fc段結(jié)合而不影響其Fab段與抗原分子結(jié)合的能力，其親和填料可以用于從血清、腹水、組織培養(yǎng)物等上清中結(jié)合吸附并純化免疫球蛋白（抗體）。

技術(shù)指標：

抗體與蛋白A、蛋白G的結(jié)合力：

注：-表示不結(jié)合；+表示微弱結(jié)合；++表示中等結(jié)合；+++表示很強結(jié)合。

應用舉例：

結(jié)合緩沖液：20 mM磷酸鹽緩沖液（PB），pH 7.4

洗脫緩沖液：0.1 M甘氨酸-鹽酸緩沖液，pH 2.7

中和緩沖液：1 M Tris-HCl，pH 9.0

1)1 ml重組蛋白G瓊脂糖凝膠預填柱，用5 ~ 10個柱床體積的蒸餾水洗去保存液；

2)用結(jié)合緩沖液平衡 5 ~ 10個柱床體積；

3)將5 ml兔多抗血清用結(jié)合緩沖液稀釋至50 ml，0.45 μm濾膜過濾上樣；

4)用結(jié)合緩沖液平衡 5 ~ 10個柱床體積至基線；

5)用洗脫緩沖液洗脫抗體，收集洗脫峰，并用中和緩沖液調(diào)節(jié)其pH至中性；

6)每次使用后再用3 ~ 5個柱床體積的洗脫緩沖液再生清洗；

7)SDS-PAGE（圖1）電泳分析洗脫下來的兔多抗純度在95%以上。

圖 1

注意事項：

1)預填柱使用簡易方便，在沒有儀器設(shè)備的條件下也可以完成純化任務。

2)樣品洗脫后一般pH很低，應立即用堿性中和緩沖液（如1 M Tris-HCl，pH 9.0） 將收集到的抗體溶液中和到中性，或在收集容器中事先裝5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的緩沖液（如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸緩沖液），以利于維持抗體的生物活性，避免抗體失活。

3)使用時保證柱子和緩沖液的溫度一致，避免柱床內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響純化效果，如果已經(jīng)產(chǎn)生氣泡，可以自行重裝柱子。

4)通常目標樣品洗脫后應繼續(xù)用0.1 M甘氨酸-鹽酸緩沖液（pH 2.0 ~ 2.7）洗3 ~ 5個柱體積，然后用平衡緩沖液清洗5個柱體積以上，作簡易再生。

5)使用數(shù)次后應進行在位清洗，建議用0.1% Triton X-100 37℃洗1 ~ 3個柱體積（10 ~ 30 min），立即用平衡緩沖液清洗5個柱體積以上；或70%乙醇洗5個柱體積以上（可保持4 ~ 6 h），再用平衡緩沖液清洗5柱體積以上。在位清洗能去除強疏水性蛋白質(zhì)和脂類，恢復柱子的載量和流速。

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