ELISA實(shí)驗(yàn)中假陽性產(chǎn)生的原因你清楚嗎？

假陽性本底產(chǎn)生的原因

1 、抗原因素

融合蛋白對(duì)基因工程抗原特異性的影響。以丙肝診斷試劑盒為例為例，因?yàn)榘坏幕?/span>

因工程抗原為融合蛋白，包含了來自表達(dá)載體的一些序列，因此可以與血清中抗大腸桿

菌的因子發(fā)生反應(yīng)而產(chǎn)生了可疑標(biāo)本。

錯(cuò)誤排序的影響。合成肽在制備過程中，如果某些肽序列錯(cuò)誤，會(huì)導(dǎo)致合成肽特異性

改變而產(chǎn)生假陽性。另外，在構(gòu)建基因工程表達(dá)載體時(shí)引入的HCV 核苷酸發(fā)生相位改變或

點(diǎn)突變也會(huì)對(duì)抗原的特異性產(chǎn)生不利的影響，但由于基因工程技術(shù)的不斷進(jìn)步，由工藝原因

造成的抗原特異性降低會(huì)逐漸被克服。

 抗原純度對(duì)特異性的影響。以HCV 抗原為例，利用大腸桿菌大規(guī)模表達(dá)后需經(jīng)破碎

細(xì)胞、鹽析、粒子交換柱等分離純化步驟才能最后的到一定純度的HCV 抗原。目前的

工藝還不能做到抗原純度為100％，因此抗原中還混有大腸桿菌的其它雜蛋白，受過大

腸桿菌感染的人，血清中的抗大腸桿菌抗體可和這些雜蛋白產(chǎn)生反應(yīng)而引起假陽性。

2 科研血清中的正常IgG

科研血清中IgG 的濃度對(duì)HCV 試劑盒有較大的影響。HCV 試劑盒采用的間接法，酶標(biāo)抗

抗體能與人所有IgG 結(jié)合，而IgG 吸附于板孔的能力很強(qiáng)，因此我們采用100 微升樣稀加

10 微升血清來將其稀釋以降低本底。到成人時(shí)，據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)調(diào)查，成人的IgG 為12mg/ml，

而有些人的IgG 濃度會(huì)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于此，這部分人的血清經(jīng)ELISA 反應(yīng)后往往會(huì)顯色。

人血情中異常的IgG

結(jié)締組織?。ㄏ到y(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性骨髓瘤等）等病癥時(shí)，血清中的風(fēng)濕小體和其它

異常IgG（IgG 濃度達(dá)到50mg/ml）會(huì)引起本底升高或假陽性。

溶血的影響

當(dāng)溶血時(shí)，紅細(xì)胞中的血紅蛋白釋放到血清中，血紅蛋白具有過氧化物酶的性質(zhì)，當(dāng)其通

過吸附或“PP 效應(yīng)"（蛋白質(zhì)間相互吸附的現(xiàn)象）結(jié)合后，可催化A、B 液顯色而造成假陽

性。

ELISA實(shí)驗(yàn)中假陽性產(chǎn)生的原因你清楚嗎？