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    影響WB實驗代測的結(jié)果的因素有哪些?

    更新時間:2022-04-22      瀏覽次數(shù):808
      WB實驗代測的結(jié)果的因素主要有以下幾方面:
     
      1、預染marker的誤差:
     
      由于預染marker是由標準蛋白與有色染料偶聯(lián)而成的,所以偶聯(lián)后的蛋白由于表面結(jié)構(gòu)的改變,導致在SDS-PAGE中分離的線性關(guān)系沒有天然蛋白那么好;另外由于偶聯(lián)的批次不同,每個條帶針對每個批次呈現(xiàn)出的分子量會有些許的變化,所以在使用預染marker的時候,出現(xiàn)5-10%的分子量誤差是不能避免的,如果需要確切分子量需要用非預染marker來標定。
     
      2、物種差異:
     
      很多蛋白在人源、大鼠源、小鼠源中存在的長度并非*一致,具體問題還要具體分析;
     
      3、蛋白本身的性質(zhì):
     
     ?、俜肿恿繑?shù)值僅僅是一個氨基酸數(shù)值累加的相對值,與實際值本身存在差距;
     
      ②蛋白質(zhì)存在磷酸化、乙?;?、糖基化等翻譯后修飾可導致分子量增大,比如常見的CD家族蛋白糖基化修飾以后分子量都會增大許多;
     
     ?、鄣鞍踪|(zhì)存在翻譯后酶前體狀態(tài)與激活剪切狀態(tài),可使分子量變小,比如MMP2蛋白,酶源與激活態(tài)大小分別是72kDa、63kDa;
     
      ④蛋白質(zhì)存在多個轉(zhuǎn)錄本由一個基因編碼的形式,不同的轉(zhuǎn)錄本翻譯得到的蛋白分子量不一樣,比如JNK這個蛋白,本身分為JNK1,JNK2,JNK3三個亞型,三種亞型同源性較高,而且針對每個亞型還有不同分子量的轉(zhuǎn)錄本呈現(xiàn);要想正確把握蛋白分量問題不僅僅要讀說明書,還要關(guān)注這個蛋白的相關(guān)背景知識。
     
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